大多數(shù)細(xì)胞因子是免疫應(yīng)答的產(chǎn)物,在動(dòng)物和人體內(nèi)可發(fā)揮免疫學(xué)效應(yīng),終會(huì)通過上調(diào)免疫細(xì)胞對(duì)抗原物質(zhì)的免疫應(yīng)答,介導(dǎo)炎癥反應(yīng)而清除抗原物質(zhì)。
抗原刺激和病原微生物感染均可誘導(dǎo)體內(nèi)產(chǎn)生細(xì)胞因子,因此細(xì)胞因子與疾病的發(fā)生、發(fā)展有著密切的關(guān)系,它們可參與疾病的發(fā)生、發(fā)展。
另一方面,細(xì)胞株的培養(yǎng)、凍存和復(fù)蘇分為以下三點(diǎn):
細(xì)胞株的培養(yǎng)、凍存和復(fù)蘇
1)細(xì)胞株的培養(yǎng)和傳代 培養(yǎng): 用于檢測細(xì)胞因子的細(xì)胞株通常培養(yǎng)于含10%小牛血清和抗生素的培養(yǎng)液中,培養(yǎng)細(xì)胞因子依賴細(xì)胞株還有加入適量細(xì)胞因子。
在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng),3~4天傳代一次。
★ 懸浮生長細(xì)胞的傳代: 直接直接吸去或離心后吸去培養(yǎng)上清液,用新鮮培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞,1:3或1:5稀釋細(xì)胞后,分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
★ 帖壁生長細(xì)胞的傳代: 吸去培養(yǎng)液,用PBS洗滌細(xì)胞一次,加入消化液,在37℃中消化約3~10分鐘,待細(xì)胞開始脫落時(shí),倒去消化液,加入新鮮培養(yǎng)液,懸浮和吹打分散細(xì)胞。也可以待細(xì)胞全部消化脫落,500×g離心5分鐘,去除消化液,用新鮮培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞。1:3或1:5稀釋細(xì)胞后,分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
2)細(xì)胞株的凍存: 1. 取培養(yǎng)2~3天生長旺盛的細(xì)胞,用細(xì)胞培養(yǎng)液將細(xì)胞配成2×106~2×107/ml。 在1ml細(xì)胞凍存管中加入0.5ml細(xì)胞懸液,0.4ml小牛血清和0.1ml二甲基亞砜(或甘油),混勻后密封。置4℃ 1小時(shí),-20℃ 2小時(shí),然后直接放入液氮中或置液氮蒸汽上過夜后浸入液氮中。
3)細(xì)胞株的復(fù)蘇: 復(fù)蘇時(shí),從液氮中取出凍存管,立即置37℃水浴中融化細(xì)胞。將細(xì)胞直接加入10ml含15%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中,置37℃ 5%CO2飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。懸浮細(xì)胞待細(xì)胞全部沉降后小心吸去上清液,更換新鮮的上述培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng);帖壁細(xì)胞則培養(yǎng)2~3小時(shí),待細(xì)胞帖壁后,倒去培養(yǎng)液,更換新鮮的上述培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。也可以在加入新鮮培養(yǎng)液以后,500×g離心5分鐘,去上清液,加入新鮮培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。